ISOLASI dan PEMURNIAN CENDAWAN dari BERBAGAI SUMBER
Tujuan
Untuk mengisolasi dan memurnikan cendawan
Metode
Pembuatan media ASK ( agar sukrosa kentang ) dibuat dengan komposisi 200 gram kentang kupas, 20 gram sukrosa dan 20 gram agar-agar. Rebus kentang dengan air sebanyak 500 ml selama 20 menit, setelah 20 menit pisahkan antara kentang dengan air. Campur agar-agar dengan air 500ml aduk hingga rata, kemudian panaskan hingga warnaya menjadi bening, tambahkan 2 kapsul antibiotic ( klorofenikol) dengan tujuan menghambat bakteri. Ketika pemanasan tentunya volume dari air rebusan kentang maupun dari agar-agar agar berkurang, oleh maka itu tambahkan dengan aquades hingga total antara air kentang dengan agar-agar mencapai 1000ml.
Pada isolasi cendawan digunakan bahan daun singkong yang sakit, cabai yang sakit dan jamur. Potong daun singkong maupun cabai sekitar 0.5x0.5 cm . setelah dipotong masukkan ke dalam kolorks 1 % rendam selama 30 detik kemudian bilas dengan air aquades. Setelah dibersihkan keringkan dengan tisu steril. Setelah kering masukan ke media PDA ( potapo desxtrose agar). Pada isolasi jamur ambil bagian dari tangkai yang tidak kontam kemudian masukkan ke media PDA. Lakukan dengan teknik aseptic.
Pemurnian cendawan dilakukan dari hasil isolasi cendawan. Setelah melakukan isolasi, pada media PDA akan tubuh hifa-hifa dari cendawan tersebut, kemudian ambil bagian dari spora kemudian pindahkan ke media PDA yang baru.
Pada penyimpanan cendawan ke media miring dilakukan dengan tujuan koleksi, karena pada media agar miring, cendawan tahan lama dan dapat disimpan dalam jangka yang lama. Setelah pemurnian dilakukan, maka biakan cendawan hasil pemurnian dipindahkan ke agar miting. Lakukan dengan teknik aseptic.
Hasil pengamatan
1. Pembuatan media ASK
Gambar 1 gambar 2 gambar 3
2. Isolasi cendawan
B A
Gambar 4
3. Pemurnian cendawan
Gambar 5
4. Penyimpanan pada agar miring
Gambar 6 gambar 7
Keterangan gambar
Gambar 1 media cawan sebelum terkontaminasi
Gambar 2 media agar miring
Gambar 3 media cawan yang terkontaminasi
Gambar 4A) Isolasi Daun Singkong (kiri), 4B) Jamur Tiram (kanan)
Gambar 5A) pemurnian daun singkong
Gambar 6 penyimpanan media daun singkong
Gambar 7 penyimpanan media jamur tiram
Pembahasan
Media pertumbuhan adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat- zat makan(nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media yang berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolate mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Media PSA atau Potato Sukrose Agar yang komposisinya terdiri dari ekstrak kentang, sukrosa (gula pasir) dan agar. Media ini sangat dipengaruhi oleh kandungan bahan penyusunnya, seperti kandungan nutrisi dalam ekstrak kentang tergantung dari jenis, umur, lokasi tanam dan sebagainya, begitu pula dengan gula dan agar. Media pertumbuhan PSA berfungsi sebagai media pertumbuhan cendawan. ( Dwijoseputro 1994)
Teknik aseptic atau Sterilisasi adalah suatu proses untuk membunuh semua jasad renik yang ada, sehingga jika ditumbuhkan di dalam suatu medium tidak ada lagi jasad renik yang dapat berkembang biak. Sterilisasi harus dapat membunuh jasad renik yang paling tahan panas yaitu spora bakteri. Teknik aseptic sangat diperlukan dalam pembuatan media, isolasi dan pemurnian cendawan biar tidak terkontaminasi dengan mikroorganisme yang tidak di inginkan.(Hadioetomo 1993)
Isolasi adalah cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungannya, sehingga di peroleh kultur murni atau biakan murni. Kultur murni adalh kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Biakan murni diperlukan karena semua metode mikrobiologis yang digunakan untuk menelaah dan mengidentifikasi mikroba. Termasuk penelaahan ciri2 kultur, morfologis, fisiologis, maupun serologis diperlukan hanya satu macam mikroba saja
Praktikum pembuatan media PSA (potato sukrosa agar) dihasilkan media yang tidak kontam baik di media cawan maupun agar miring. Setelah beberapa hari pada media cawan tumbuh koloni atau terjadinya kontaminasi dari cendawan dari udara. Hal ini bias dilihat ada tumbuh spora yang berwarna hijau.
Hasil isolasi dari daun singkong yang sakit dan jamur tiramyang menunjukan terjadinya pertumbuhan koloni. Pada media terlihat terjadinya kontaminan dengan tumbuhnya spora dari cendawan lain. Hal ini terjadi dikarenan kerja yang dilakukan kurang aseptic, sehingga terjadinya pertumbuhan koloni baru yang bukan dari bahan.
Pemurnian cendawan hasilnya menunjukan pertumbuhan yang sangat pesat, hal ini bisa dilihat dari pertumbuhan sporanya yang banyak dan padat. Pada pemurnian cendawan tidak terjadi kontaminasi, hal ini dapat terlihat tidak ada pertumbuhan mikroorganisme yang lain.
Pemurnian cendawan pada medium agar miring tidak terjadi kontaminan pada daun singkong dan cendawanya tumbuh dengan pesat. Pada pemurnian jamur tiram terjadi pertumbuhan dan tidak terjadi kontaminasi.
Simpulan
Untuk mengisolasi dan memurnikan cendawan dibutuhkan media pertumbuhan. Komposisi media pertumbuhannya yaitu PDA ( potato dextrose agar) dan PSA ( potato sukrosa agar).
